Антибиотест-универсал для определения остаточных количеств антибиотиков и других антимикробных химиотерапевтических веществ в мясе всех видов убойных животных, в мясе птицы, субпродуктах, в меде, яйце, рыбе, молоке, яйцах, моче.
Тест предназначен для качественного определения остаточных количеств антибиотиков и других антимикробных химиотерапевтических веществ в мясе всех видов убойных животных, в мясе птицы, субпродуктах, в меде, яйце, рыбе, молоке, яйцах, моче.
В тесте используется микробиологический метод. Тест основывается на способности антибиотиков и других антимикробных химиотерапевтических веществ подавлять рост тест–культуры. Наличие антибиотиков и других антимикробных химиотерапевтических веществ устанавливают по отсутствию изменения цвета специализированной питательной среды теста. Основу теста составляют высокочувствительные к антибиотикам тест–культуры микроорганизмов, рост которых угнетается если исследуемый образц содержит микроколичества веществ антибиотического действия.
Время инкубации теста до получения результата составляет 4 часа ± 30 мин при температуре 60-62°С.
Тест представляет собой флакон с готовой цветной плотной питательной средой, содержащей суспензию спор Geobacillus stearothermophilus штамм ВКМ В-718. Выпускается во флаконах объемом: 20 мл содержащих специализированную среду и споры тестовых микроорганизмов общим объемом -1,5 мл.
Срок хранения тестов составляет один год при температуре
от +3 до +5°С.
Подготовка к проведению анализа
Перед началом анализа тест необходимо активировать кратковременным нагреванием. Для этого содержимое флакона необходимо расплавить. Для этого флакон помещают на водяную баню. При этом запрещено снимать с флакона крышку или нарушать целостность алюминиевого колпачка. Плавление среды во флаконе проводится в течении 1-3 минут. Среда считается расплавленной правильно, в случае полного перехода плотного содержимого флакона в жидкое состояние, а также отсутствия во флаконе комочков или сгустков.
После полного расплавления необходимо снять флакон с водяной бани, хорошо перемешать его содержимое круговыми движениями и дать ему остыть до комнатной температуры.
В асептических условиях удалить с флакона пластиковый колпачок и / или в случае цельно- алюминиевого колпачка отогнуть один из лепестков в центре подготавливая таким образом поле для прокола иглой.
Подготовка пробы
Отбор и подготовку проб проводят в соответствии с ГОСТ Р ИСО 17604, ГОСТ Р 51447, ГОСТ Р 51448, ГОСТ Р 50396.0, ГОСТ ISO 7218, ГОСТ Р ИСО 6887-2 с учетом нижеследующего:
С поверхности и глубины (суммарно) лабораторной пробы с помощью стерильных ножниц и пинцетов берут анализируемую пробу массой не менее (25,0 ± 0,5) г и измельчают на ротационном гомогенизаторе.
Во флакон или колбу с (25,0 ± 0,5) г измельченной анализируемой пробой добавляют 25 см3 физиологического раствора и тщательно перемешивают, получая при этом исходную суспензию.
Затем емкость с исходной суспензией выдерживают в термостате при температуре (37 ± 1) ºC в течение 90 мин, периодически тщательно перемешивая.
Часть исходной суспензии после термостатирования переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин. Полученную надосадочную жидкость отбирают в стерильные пробирки.
Транспортирование проб в лабораторию и их хранение – в соответствии с ГОСТ ISO 7218.
Проба должна быть представительной, без повреждений и изменений при транспортировании и хранении. Допускается замораживать пробы.
Проведение анализа
Надосадочную жидкость одной пробы, полученной по п.5.1, вносят параллельно стерильным шприцем в флакон с тестом посредством прокола резиновой мембраны пробки. В каждый тест вносят по 150-200 мкл исследуемой пробы.
Для более достоверного определения необходимо вносить каждую пробу в два флакона, дублируя анализ.
Тесты с внесенными пробами инкубируют при комнатной температуре не менее 30 мин для диффузии надосадочной жидкости в агар, затем инкубируют в термостате при температуре (60 ± 1) ºC в течение (3,5 ± 0,5) ч крышками вверх.
Обработка результатов
Обработку результатов проводят после окончания инкубации и остывания тестов до комнатной температуры.
Отсутствие роста тест-культуры, подтверждаемое сохранением синего цвета среды во флаконе следует оценивать как положительный результат, т. е. как наличие антибиотиков или других антимикробных химиотерапевтических веществ в анализируемой пробе.
Наличие роста тест-культуры с изменением цвета среды с синего на желтый, следует оценивать как отрицательный результат, т.е. как отсутствие антибиотиков или других антимикробных химиотерапевтических веществ в анализируемой пробе.
Оформление протокола испытания
Протокол испытания должен содержать:
- информацию, необходимую для полной идентификации образца;
- метод определения со ссылкой на стандарт ГОСТ Р 55481-2013;
- полученные результаты;
- все подробности проведения испытания, не предусмотренные настоящим стандартом или считающиеся необязательными, но которые могут повлиять на результат.
Результат испытания записывают следующим образом: «в анализируемой пробе качественным методом не обнаружены антибиотики и другие антимикробные химиотерапевтические вещества» или «в анализируемой пробе качественным методом обнаружены антибиотики или другие антимикробные химиотерапевтические вещества».